High T7 RNA Polymerase

貨號(hào)：T0125

儲(chǔ)運(yùn)條件 ：-20℃

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本產(chǎn)品是經(jīng)基因工程改造的熱穩(wěn)定T7 RNA聚合酶，對(duì)噬菌體T7啟動(dòng)子序列具有高度特異性，跟野生型噬菌體T7 RNA聚合酶相比，它可在更高的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。High T7 RNA Polymerase可在37~52℃條件下進(jìn)行高效的體外轉(zhuǎn)錄。

活性定義

1活性單位(U)是指在50℃ 1 h內(nèi)使1 nmol ATP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

適用范圍

1. 合成單鏈RNA,包括mRNA,siRNA, gRNA等各類RNA的前體。

2. 合成標(biāo)記或未標(biāo)記的高特異性RNA探針。

3. 利用帽子類似物合成加帽的mRNA。

質(zhì)量控制

蛋白純度檢測(cè)

本品經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)純度≥95%。

核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)

將酶液與超螺旋質(zhì)粒DNA在37℃溫育4 h，通過(guò)DNA電泳檢測(cè)質(zhì)粒無(wú)變化。

DNase 殘留檢測(cè)

將酶液與雙鏈DNA 底物在 37℃溫育 16 h，通過(guò) DNA 電泳檢測(cè)雙鏈DNA底物無(wú)變化。

RNase殘留檢測(cè)

將酶液與  RNA 在 37℃溫育 1 h，通過(guò)電泳檢測(cè) RNA 無(wú)降解。

功能檢測(cè)

體外轉(zhuǎn)錄合成實(shí)驗(yàn)，通過(guò) RNA 電泳可以檢測(cè)到目的條帶。 

使用方法

推薦反應(yīng)體系（20 μl）

 注:建議加完Nuclease-Free Water，再加CTP/GTP/ATP/UTP。

推薦反應(yīng)條件

50℃反應(yīng) 1 h。

反應(yīng)結(jié)束后，可向上述 20μl 反應(yīng)液中加入1μl dsDNase，37℃孵育15 min用于去除DNA模板。

注意事項(xiàng)

1. 模板 DNA 的純度對(duì)體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)至關(guān)重要。質(zhì)粒DNA抽提過(guò)程中引入的RNase A殘留會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)錄RNA的質(zhì)量，建議使用OD260/280為1.8~2.0的高純度 RNase-free 質(zhì)粒。

2. 模板DNA可通過(guò)線性化環(huán)狀質(zhì)粒或PCR 獲得。模板DNA上游需含有T7啟動(dòng)子序列，下游為平末端或編碼鏈5' 末端突出。

3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套及口罩進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。