在分子生物學和蛋白質研究中，免疫共沉淀 (Co-IP)和免疫沉淀 (IP)實驗是探索蛋白 質相互作用、驗證靶蛋白結合關系的關鍵技術。無論是研究信號通路、蛋白復合物，還是疾病相關蛋白網絡，IP/Co-IP 都能提供直接的實驗證據，幫助科學家深入解析生命活動的分子機制。本期內容將系統梳理IP/Co-IP 實驗的詳細步驟以及如何分析實驗結果。

一、實驗原理

免疫沉淀/免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質的方法。 在免疫沉淀中，通過特定抗體與目標蛋白結合，形成抗體—抗原復合物，再利用沉淀的方法將其 從混合物中分離出來，從而純化目標蛋白。而免疫共沉淀可以檢測兩個已知蛋白之間的相互作用。當用預先固化在beads上的蛋白質A 的抗體免疫沉淀A 蛋白，那么與A 蛋白在體內結合的蛋白質B 也能一起沉淀下來。

①用proteinA/G連接抗體，然后用抗體去抓目的蛋白

②beads上已經偶聯了標簽抗體，可以直接抓目的蛋白

二、實驗流程

樣品制備

植物樣本：分成小塊后用液氮研磨粉碎，然后加入裂解液(加蛋白酶抑制劑)冰上/借助超聲裂解合適 的時間，離心取上清。

動物細胞：棄去培養基，用PBS 洗幾次，然后加入裂解液(加蛋白酶抑制劑)冰上裂解合適的時間， 離心取上清。

動物組織：剪碎后加入裂解液(加蛋白酶抑制劑),然后用勻漿器勻漿，裂解充分后離心取上清。

平衡beads

用TBS 等緩沖液或者裂解液清洗beads3-5 次，將beads 中的保護液替換成實驗中緩沖液體系，避免影 響下游實驗。

孵育

方法一：抗體和磁珠先孵育

選擇經過IP驗證的抗體，可以減少失敗的可能性，此外抗體的用量也較為重要，抗體用量過少不 利于后續抗原結合，而抗體過多就不能完quan吸附在beads 上，造成浪費，一般建議抗體使量為 2-5ug  即可。抗體和beads 室溫孵育30-60min 或4℃孵育1-2h后，吸棄上清，加入裂解后的樣品共孵育。

注：若使用已經偶聯好標簽抗體的beads，則可以直接和裂解好的樣品孵育，不用偶聯抗體。

方法二：抗體和抗原先孵育

抗體和抗原先進行孵育，然后抗體抗原復合物與beads進行孵育。

洗雜

用裂解液或PBS 洗滌沉淀，2500rpm (約1000g)離心5min, 或瞬時高速離心，小心吸除上清，重復此 步驟3-5次。這一步是為了洗去未結合的雜蛋白。