貨號：T0042

儲存：室溫,避光,12個(gè)月

產(chǎn)品簡介:

在尿液樣本中加入蛋白沉淀劑和麗春紅 S，離心，蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物被沉淀下來，將沉淀物加入堿性溶液溶解后，分光光度法檢測 560nm 處吸光度，計(jì)算蛋白含量。Urine Protein Assay Kit(麗春紅比色法)主要用于定量檢測尿液中蛋白含量，較雙縮脲法靈敏，對白蛋白的敏感性比球蛋白要高。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成:

自備材料:

蒸餾水、離心管、試管、比色杯、分光光度計(jì)

操作步驟(僅供參考):

1. 取適量麗春紅 S試劑(10x)，按 1:9 加入蒸餾水，稀釋至 1x，室溫可保存 2~3個(gè)月。

2. 取 1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)中，充分溶解后配制成 20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。

3. 取適量 20mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn),稀釋至濃度分別為 0、200、400、600、800、1000、1200、1600ug/ml或所需濃度。特別提示：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中；例如待測蛋白溶解于蔗糖中，亦取 20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶解于蔗糖中，一般也可以用 0.9% NaCl或 PBS 作為溶解 BSA稀釋液。稀釋后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)-20℃長期保存。

4. 制作蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線: 各取 100u 上述稀釋度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)，與測定樣本操作相同(見第6步)。"0"號管空白調(diào)零，比色杯光徑25px，560nm 比色，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5. 半定量實(shí)驗(yàn):取3~5ml 新鮮尿液轉(zhuǎn)移入小試管，滴加磺基水楊酸溶液 3~4滴，形成界面，立即觀察，如有渾濁，提示尿液中含有蛋白質(zhì)，渾濁深淺表示含量多少。

6. 取離心管，根據(jù)上述半定量實(shí)驗(yàn)測得的蛋白濃度按下表要求加入待測樣本和蒸餾水，再加入 1ml 1x麗春紅S試劑，混勻，3500g 離心10min，將上清緩緩倒出后，倒置于濾紙上數(shù)分鐘，用濾紙條吸附管壁上多余的試劑(勿觸及管底沉淀)，再加入2ml Alkaline Buffer 至沉淀中，充分混合使沉淀溶解。

7. 分光光度計(jì)測定 560nm 波長處的吸光度，如無560nm，540~595nm 之間的波長也可，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的蛋白濃度

8. 參考區(qū)間: 46.5±18.1 mg/L

注意事項(xiàng):

1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液后，即獲得蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃長期保存。

2. 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否則待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確。

3. 待測樣本蛋白含量<0.1g/L時(shí)，可用 1m!樣本加0.1m| 麗春紅S試劑(10x)，混勻，余下操作同上。

4. 該試劑盒也可以用酶標(biāo)儀檢測。

5. 本法較為靈敏，較比濁法誤差小，膽hong素<4mg/L時(shí)對結(jié)果無影響，也不受室溫影響。為了加快 BCA 法測定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱，但是切勿過熱。室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存。

6. 離心沉淀后上清液必須全部去除，但不損失沉淀物，否則可影響比色結(jié)果。為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱，但是切勿過熱。室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存。

7. 試劑開封后請盡快使用，以防影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)效果。