BCA蛋白濃度測定試劑盒

貨號：B5001

存儲條件：冰袋運輸。試劑盒中A、B液室溫或4℃保存；蛋白標準品（BSA）置于4℃保存，有效期2年。

產品規格：

BCA試劑A   100ml

BCA試劑B   3ml

蛋白標準品   2x1ml (5mg/ml)

PBS溶液     10ml

產品描述

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法。基于雙縮脲反應，即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu+，產生一種紫藍色復合物，在562nm處有高的吸光值，該反應產物的量與蛋白質濃度成正比。BCA蛋白濃度測定法實現了蛋白質濃度測定的簡便、靈敏、快速和穩定性。試劑盒中提供的蛋白標準品為用戶制作標準曲線提供了便利。該BCA蛋白濃度測定試劑盒可用于比色皿法檢測，也可用于微孔板法檢測。前者雖需較大量（100μL）的蛋白樣品，但由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:20（v/v），從而降低干擾物質帶來的影響。后者操作簡單方便，僅需少量（10-25μL）的蛋白樣品。不過，由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:8（v/v），某種程度上限制干擾物質的承受濃度以及降低最di檢測水平。

產品特點

1）靈敏度高，最小檢測蛋白量可達0.2μg，檢測濃度下限達10μg/mL(在20~1000μg/ml 濃度范圍內有較好的線性關系）。

2）速度快，比一般的BCA蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。比傳統的Lowry法檢測速度約快4倍。

3）線性范圍廣，20-1000μg/mL濃度范圍內有較好的線性范圍。

4) 不受大部分樣品中的化學物質的影響, BCA法測定蛋白濃度的最da優點是蛋白濃度的測定可以耐受高濃度的去垢劑, 可以兼容樣品中高達5%的SDS; 5%的Triton X- 100; 5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM; β-巰基乙醇低于0.01%。

操作說明

BCA 工作液配制：

將試劑A和試劑B按照體積比50:1比例混合配成BCA工作液。取50mL試劑A與1mL試劑B混合，配成51mL BCA工作液。兩者混合時會有沉淀形成，徹di混勻后沉淀消失。

微孔板測定程序：（工作范圍 20-2000 μg/ml）

1. 蛋白標準品配制：室溫wan全溶解蛋白標準品， 取 20µl 5mg/ml BSA 蛋白標準溶液用 PBS 溶液稀釋至 100µl使其終濃度為 1.0 mg/ml。

2. 按照下表配制 BSA 標準測定溶液：

3. 將適當體積的待測樣品加入到微孔板中，并用 PBS 補足到 20 µl

4. 向微孔板中加入200μL BCA工作液混勻, 37 ℃放置30分鐘； 注：也可以室溫放置2小時,或 60 ℃放置30分鐘。BCA 法測定蛋白濃度時,顏色會隨著時間的延長不斷加深,并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低, 適合在較高溫度孵育,或適當延長孵育時間。

5. 測定 562 nm處的吸光值， 并記錄讀數； 以不含BSA的樣品的光吸收值作為空白對 照。

6. 以A562為縱坐標, BSA含量為橫坐標, 繪制標準曲線, 計算樣品中的蛋白濃度. 如果蛋白濃度不在標準曲線范圍內, 請稀釋樣品后重新測定。

試管測定程序：（工作范圍 20-1000 μg/ml）

1. 蛋白標準品配制：室溫wan全溶解蛋白標準品, 取150µL 5mg/ml BSA蛋白標準溶液,加入600μL PBS溶液稀釋至750µl，使其終濃度為1.0 mg/ml。

2、按照下表配制 BSA 標準測定溶液：

3. 將適當體積的待測樣品加入到試管中，并用 PBS 補足到100 µl；

4. 向試管中加入 2ml BCA 工作液，混勻，37 ℃放置30分鐘；

5 、6 步驟同上。

6. 注意事項

1）BCA蛋白測定法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，顯色反應的速度和溫度有關，需注意保持定時和定溫，以確保精確定量。

2）長期保存，若發現BCA試劑A或者試劑B有沉淀發生。請37oC溫育并伴隨攪拌促使其充分溶解。如發現細菌污染，則應丟棄。

3）實驗操作規范，提高上樣量的精確度。

4）每次測定都需做相應的標準曲線，因為顯色反應與溫度和時間的變化有關，精準蛋白定量宜每次都做標準曲線。

5）本公司所有產品僅限用于研發，必須專業人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服并遵守生物實驗室安全操作規程！